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　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)詳情

　　產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

　　檢測范圍：5pg/ml-300pg/ml

　　使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)含量。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)水平。用純化的人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)，再與 HRP 標(biāo)記的可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)濃度。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒操作步驟：

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　200pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　100pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　50pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　25pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　12.5pg/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品*終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同 3。

　　8.洗滌：操作同 5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度( OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋定倍數(shù)( n 倍)后再測定，計(jì)算時(shí)請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

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