技術(shù)文獻(xiàn)
提取牛血清白蛋白及儲存的方法!
提取辦法:
1、鹽析
取小牛血清0.5ml+PBS液0.5ml+飽和硫酸銨2.3ml,充分殽雜勻稱,靜置20min,2500r/min 離心10min。
2、透析
取玻璃紙張,折成袋形,將離心后的上清液倒入袋內(nèi),用線扎緊上口(過細(xì)要留有清閑),放入有自來水的小燒杯中透析,要不斷震動,每隔2min換次水,換15次。放入試管待用。
3、準(zhǔn)備與電泳
(1)取兩條2.5cm x 8.0cm 的膜條,將膜條無光輝面向下,放入作育皿中的巴比妥緩沖液中沖鋒滲透。
(2)將充分滲透的兩條膜條取出,用干凈濾紙吸去多余的緩沖液,以醋纖膜的光輝面距端1.5cm處作為點樣線,并用鉛筆在上面編好號①②。
(3)用兩個點樣器分別在標(biāo)準(zhǔn)液和測定液中櫵下,點樣器下端粘上薄層標(biāo)準(zhǔn)液和樣液,然后將點樣器豎直,舉行點樣。
(4)電泳 將點樣后的膜條置于電泳槽架上,組織時點樣面向下(無光輝面),點樣端置于陰,膜條與濾紙貼緊,待平衡5min后,即可通電。調(diào)治電泳儀,使南北間距的電壓為15v/cm,電流0.4~0.6Ma/cm膜條,通電50分鐘封閉電源。
(5)通電結(jié)束后,用鑷子取出膜條,直接浸于盛有氨基10B的染色 液中,染2min取出,立刻浸于漂洗液中,分別在漂洗液中各漂洗5min,直至布景漂凈為止。用干濾紙吸干薄膜。
(6)觀察兩張薄膜的色彩。
儲存辦法:
每10克加100毫升水進(jìn)行溶解,或用 PBS溶解也可,視用處而決議。然后分裝成小支。若不運用防腐劑可儲存在零下20或30攝氏度的恒溫柜中,若運用防腐劑則可儲存在零上4攝氏度的環(huán)境下。
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