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技術(shù)文獻(xiàn)

技術(shù)文章:改良Lowry法蛋白定量試劑盒2023已更新報(bào)價(jià)
閱讀次數(shù):15315 發(fā)布時(shí)間:2023/7/31 11:21:11
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改良Lowry法蛋白定量試劑盒

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

目上常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是:BCA蛋白定量試劑盒(BCAProteinAssayKit)和Bradford蛋白定量試劑盒(BradfordProteinAssayKit)。改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物,后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色比色物,用分光光度法(酶標(biāo)儀或分光光度計(jì))檢測(cè)750nm處吸光度,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,求得待測(cè)蛋白樣品的濃度,在1~1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

PD003-500T

PD003-1000T

Storage

試劑(A):Folin-CiocalteuReagent

5ml

10ml

RT避光

試劑(B):改良LowryReagent

B1:LowryA

100ml

2×100ml

RT

B2:LowryB

2ml

4ml

RT

B3:LowryC

2ml

4ml

RT

臨用,按LowryA:B:C=50:1:1比例配制改良LowryReagent,即配即用。

試劑(C):蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA,10mg/ml)

1ml×2

4ml

-20°C

試劑(D):蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液

2ml

4ml

RT

說(shuō)明書(shū)

一份







根據(jù)樣品數(shù)量按照試劑(A):Folin-CiocalteuReagent:ddH2O=1:1的比例配制工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

儲(chǔ)存條件:

12個(gè)月有效。

 

操作步驟(僅供參考):

1、取適量10mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取150μl 10mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),加入850μl稀釋液,充分混勻,即配制1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

2、根據(jù)樣品數(shù)量,按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1的比例配制改良LowryReagent工作液,充分混勻。

3、將1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)用稀釋待測(cè)樣品的溶液5倍梯度稀釋?zhuān)瑵舛确謩e為300μg/ml、60μg/ml、12.5μg/ml、2.5μg/ml、0μg/ml,各取40μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔。

4、加待測(cè)蛋白樣品或稀釋液(空白對(duì)照)到96孔板的樣品孔中,如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液不同,應(yīng)在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液;如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液相同,無(wú)需在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。

5、用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良LowryReagent工作液加入至各孔,立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻。室溫準(zhǔn)確孵育。

6、用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中,立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。

7、輕輕混勻96孔板,酶標(biāo)儀或微量滴定板讀數(shù)儀測(cè)定750nm處吸光度,也可用分光光度計(jì)測(cè)定,但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積,檢測(cè)樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。

 

注意事項(xiàng):

1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液中含有防腐劑,不影響后續(xù)檢測(cè),該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃保存。

2、待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。

3、如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積。

4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅供科研使用,嚴(yán)禁它用。

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