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　　ELISA試劑盒選擇要點(diǎn)及ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的注意事項(xiàng)
 

　　ELISA試劑盒對化學(xué)試劑的純度、凈度以及精密度要求愈加嚴(yán)格和門化。ELISA試劑盒選擇十分重要了，主要參考以下四個(gè)方面：

　　一、檢測方式

　　如檢測ELISA試劑盒有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶ap也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。BUNSEN本生試劑盒 此外ELISA結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

　　二、實(shí)驗(yàn)類型

　　雖然有多種類型，不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。in-cell Elisa和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)elispot是兩種特殊的類型，in-cell Elisa需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。elispot有點(diǎn)像蛋白印跡western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是48孔板進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)。

　　三、抗體類型

　　單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于Elisa檢測，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

　　四、交叉反應(yīng)

　　如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自zhi定動(dòng)物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾�確認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行Elisa檢測時(shí)，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。

　　做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線喲哪些注意事項(xiàng)：

　　由于以漸近線開始和結(jié)束，曲線范圍之外的數(shù)據(jù)可能會(huì)產(chǎn)生不準(zhǔn)確的結(jié)果。更進(jìn)一步說，試著在S中間標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)工作。一般來說，未知計(jì)算在曲線的線性范圍內(nèi)更準(zhǔn)確。可以稀釋超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的樣本，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，然后根據(jù)初始稀釋值乘以相應(yīng)倍數(shù)。做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線需要注意事項(xiàng)如下：

　　1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

　　2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。BUNSEN本生試劑盒 而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

　　3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

　　4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

　　5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要有5個(gè)點(diǎn)。

　　6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999。

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司