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　　鏈霉親和素磁珠(Streptavidin Beads)說明資料

　　簡介：

　　使用強(qiáng)有力的偶聯(lián)技術(shù)將磁珠粒子表面全部用于結(jié)合天然的鏈霉親和素，提高生物素標(biāo)記分子的捕捉能力和降低背景信號(hào)。結(jié)合的鏈霉親和素磁珠表面具有更高的功能穩(wěn)定和更優(yōu)良的均勻性。磁珠表面擁有一層具有很強(qiáng)鍵合能力的鏈霉親和素，同時(shí)具有的可重復(fù)性。具有的液相反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性。磁珠粒徑 1000nm。由聚苯乙烯包覆。本公司提供不同包裝規(guī)格的產(chǎn)品 1mL、5mlL、20mL。固含量為 10mg/ml。

　　儲(chǔ)存：懸浮于 10mM pH7.4 的 PBS 緩沖液中 其中(0.02% Proclin300，0.02% Tween 20)，2-10℃保存，保質(zhì)期為 18 個(gè)月。儲(chǔ)存時(shí)磁珠容器要豎直存放，沉降下來的磁珠被溶液保護(hù)，防止粘附在管壁上面的磁珠失水，磁珠生物活性下降。避免冰凍，冰凍后可能造成磁珠活性下降。

　　1mg 鏈霉親和素磁珠可結(jié)合 1000 pmoles 游離生物素 400 pmoles 生物素化寡核苷酸 15ug 生物素化抗體。雙鏈 DNA 結(jié)合情況與片段長度有關(guān)。

　　原理：

　　鏈霉親和素偶聯(lián)的磁珠作為固相基質(zhì)可簡便快捷、有效地與許多生物素化復(fù)合物結(jié)合，如小分子肽類、蛋白、抗體、糖類、凝集素、寡合核苷酸 DNA/RNA 等，因而其可用于分子與免疫診斷、細(xì)胞分選、cDNA 表達(dá)文庫的建立和藥物篩選等。

　　注意：

　　鏈霉親和素磁珠結(jié)合能力與特定靶分子的大小有關(guān)。確保樣品中無過量的游離生物素存在，因?yàn)橛坞x生物素比大分子量的靶分子更容易與鏈霉親和素結(jié)合。生物素化引物擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物溶液中，盡量去除游離生物素化引物，然后與磁珠結(jié)合，因?yàn)樯�物素�?biāo)記的引物比帶生物素的 DNA 片段更容易與磁珠結(jié)合。去除生物素化引物可以通過超濾法、微透析法，一般的 DNA 純化回收也是可以的去除生物素標(biāo)記的引物。 .建議每次應(yīng)用中，磁珠的用量應(yīng)通過滴定法進(jìn)行優(yōu)化，配體分子的大小和生物素化程度均可能影響二者結(jié)合能力。磁珠與生物素化配體的比例會(huì)直接影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，磁珠數(shù)量恒定下，生物素化配體在較低溶度情況下，隨著生物素化配體溶度的增加，磁珠與配體結(jié)合后，其具有的配體結(jié)合靶物質(zhì)能力提高，但是超過飽和吸附后，生物素化配體增加，不能提高磁珠配體結(jié)合體的與靶物質(zhì)結(jié)合能力。生物素化配體的制備，推薦使用如 Pierce 或 Sigma 生產(chǎn)的生物素化試劑。不同的功能集團(tuán)：胺類、巰基羧基碳水化合物、酪氨酸和組氨酸側(cè)鏈、胍、胞嘧啶堿基都可以用生物素標(biāo)記。生物素化過程中可能造成靶分子的活性喪失，需要根據(jù)具體應(yīng)用避免。在DNA 合成過程中一般是在寡核苷酸引物 5’端標(biāo)記生物素，用 Pierce 或 Sigma 的 biotin-X-NHS Ester 可以將蛋白質(zhì)生物素化。當(dāng)磁珠與配體結(jié)合后，用配體去捕獲目標(biāo)物，需要靶物質(zhì)游離在溶液中，而且與配體結(jié)合的位點(diǎn)裸露在外面。

　　操作步驟(供參考)

　　磁珠準(zhǔn)備

　　1、使用渦旋均勻(也可采用超聲分散，將試管小心放入普通超聲波清洗器中，超聲 3min 左右)，用移液器取需要量的磁珠到一離心管中。

　　2、離心管置于磁力架中約 1 分鐘左右可完成分離。用移液器移除液體。

　　3、加入特定實(shí)驗(yàn)的洗滌液體，試管蓋好，漩渦震蕩混勻。然后磁分離移除液體。

　　4、重復(fù) 1~2 次洗滌步驟，并將磁珠懸浮于適量溶液。

　　做抗體或蛋白相關(guān)實(shí)驗(yàn)可采用 PBS 或生理鹽水緩沖溶液洗滌 SA 磁珠 2~3 遍;做核酸相關(guān)實(shí)驗(yàn)應(yīng)使用 1× B&W Buffer 洗滌至少 3 遍后使用。2× B&W Buffer：10mM Tris-Hcl(pH7.5) 1mM EDTA 2M NaCl。本產(chǎn)品未添加核糖核酸酶，做 RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)應(yīng)做去除 RNase 處理，RNA 實(shí)驗(yàn)：使用溶液 A(A 液：DEPC-treated 0.1M NaOH DEPC-treated 0.05M NaCl)洗滌 SA 磁珠兩次，每次 2min，再用溶液 B (DEPC-treater 0.1M NaCl)洗滌一次，將 SA 磁珠懸浮于 B 液中。與生物素化配體結(jié)合鏈霉親和素磁珠與 Biotin-Antibody 或 Biotin- Peptides 的結(jié)合

　　1、計(jì)算磁珠和生物素化抗體所需用量。每 mg 鏈霉親和素磁珠量結(jié)合 15ug 抗體或 300pmol 生物素化多肽，通常不需要加

　　2、懸浮磁珠后和生物素化抗體在室溫下孵育 30 分鐘，旋轉(zhuǎn)混勻。

　　3、孵育后，離心管置于磁力架 2 分鐘，移除上清。

　　4、用 PBS/BSA 洗滌磁珠 4-5 次。

　　5、懸浮磁珠稀釋至所需濃度，用于下游實(shí)驗(yàn)。鏈霉親和素磁珠與核酸的結(jié)合

　　1、取適量洗滌好的磁珠。

　　2、用 2xB&W 緩沖液懸浮磁珠使終濃度為 1ug/ul 或?qū)嶒?yàn)的適宜濃度。

　　3、加等體積的生物素化 DNA/RNA 溶液。

　　4、室溫下，旋轉(zhuǎn)或輕敲離心管混合。30bp 左右片段孵育 10 分鐘左右，1kb 左右片段孵育 15 分鐘。

　　5、孵育后，將離心管放在磁力架上 1 到 2 分鐘，并移除液體。

　　6、用 1xB&W 緩沖液洗滌磁珠 2-3 次。

　　8、用適宜的溶液懸浮磁珠，表面結(jié)合了核酸片段的磁珠，用于進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。鏈霉親和素磁珠與抗體蛋白以及核酸的解離

　　抗體/蛋白分離：將結(jié)合后的磁珠重懸于 0.1% SDS 中，置于 95℃左右水中 5 分鐘。注意：這樣可能導(dǎo)致蛋白活性下降。核酸分離：用 PH8.0 的 TE 溶解，95℃溫浴 5 分鐘，可以解離約 98%的核酸

　　本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

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