技術(shù)文獻
BUNSEN本生:決定ELISA實驗成敗的關(guān)鍵-洗滌
1、Elisa試劑盒技術(shù)小編詳解:很多人做ELISA實驗,覺得真簡單,無非就是加樣,保溫,洗滌等操作步驟?墒菍嶒灲Y(jié)果經(jīng)常不盡人意。BUNSEN本生小編就給大家總結(jié)一下ELISA實驗洗滌要點!
2、洗滌在 ELISA 過程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。
4、在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯(吐溫,Tween)一類物質(zhì)即右達到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,為非離子型的表面張力物質(zhì),常作為助溶劑。
5、根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號,結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯 20,在 ELISA 中為常用。它的洗滌效果好,并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結(jié)合的作用。
6、洗滌如過沒清洗干凈,特別在后一次,如有酶結(jié)合物的非特異性吸附,將使空白值升高。另外,在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性 IgG 吸附在固相上而未被洗凈,也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
ELISA 板的洗滌一般可采用以下方法:
、傥煽變(nèi)反應(yīng)液;
②將洗滌液注滿板孔;
、鄯胖 2 min,略作搖動;
、芪煽變(nèi)液,也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為 3~4 次,有時甚至需洗 5~6 次。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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