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本生歸納總結:ELISA顯色淡的原因及解決方案
顯色是ELISA中的后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。ELISA顯色淡的原因及解決方案:
原因一:試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高。
解決方案:盡量縮短運輸時間,夏季應放冰塊降溫。
原因二:試劑盒未充分平衡。
解決方案:試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
原因三:培養(yǎng)箱溫度不足37℃。
解決方案:注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應注意。
原因四:保溫時間不足。
解決方案:校正定時鐘準確定時。
原因五:洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加。
解決方案:按說明書要求保留洗滌時間,準確記住洗滌次數(shù)。
原因六:移液器吸液量不足,吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔。
解決方案:校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內(nèi)壁要清潔,一次性使用。
原因七:蒸餾水水質有問題。
解決方案:使用新鮮合格的蒸餾。
原因八:底物作用時間不足。
解決方案:準確定時。
顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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