本生詳解生物細(xì)胞凍存管_技術(shù)文章_本生（天津）健康科技有限公司

技術(shù)文獻(xiàn)

本生詳解生物細(xì)胞凍存管
閱讀次數(shù)：15641 發(fā)布時間：2021/8/31 13:51:50

分享到：

　　本生詳解生物細(xì)胞凍存管

　　細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲存時間是無限的。

　　細(xì)胞凍存步驟說明：

　　配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛血清的凍存培養(yǎng)液;

　　取對數(shù)生的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。

　　去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長的細(xì)胞消化下來;

　　離心 1000rpm，5min;

　　去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的終密度為 5×106/ml~1×107/ml;

　　將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;

　　在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者;

　　凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

　　生物細(xì)胞凍存管—生物提供的細(xì)胞凍存管由透明高分子材料聚丙烯(PP)制成，經(jīng)特殊工藝制造，使其能耐受超低溫，并無泄漏，適用于細(xì)胞和組織的低溫冷藏。

　　4 種規(guī)格：0.5ml、1.5ml、2.0ml 、5.0ml

　　無 DNase/RNase 、無熱原，無內(nèi)毒素

　　管壁均勻，透明，帶可立式裙邊

　　管體有�？炭潭确奖銓�(shí)驗(yàn)過程的記錄

　　凍存管請放置液氮?dú)庀鄬又斜４�，放置液相中存在爆管風(fēng)險

　　關(guān)于細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)：

　　1. 為保持細(xì)胞存活率，一般都采用慢凍存融的方法。

　　2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為-1℃~12℃/ 分鐘，當(dāng)溫度下降達(dá)-25℃時，下降速度可增至-5~-10℃/ 分鐘，到-100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成。

　　3. 初次凍存者在下降凍存時，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后，僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。

　　4. 各種細(xì)胞對凍存速度的要求也不一樣;上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞耐受性可能大些，骨髓干細(xì)胞-2~-3℃/ 分鐘合適;胚胎細(xì)胞耐受性較小，不宜太快。總之在一開始時，下降速度不能超過-10℃/ 分鐘。

　　5. 用什么防護(hù)劑合適和用量多大，要依細(xì)胞而定，初代培養(yǎng)細(xì)胞用 DMSO 較好，一般細(xì)胞可用甘油;用量以較小為好。有人認(rèn)為人皮膚上皮細(xì)胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。

　　6. 原則上細(xì)胞在液氮中可貯存多年，但為妥善起見，凍存一年后，應(yīng)再復(fù)蘇培養(yǎng)一次，然后再繼續(xù)凍存。

　　7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護(hù)工作，以免凍傷

　　8. 注意自身的安全，對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如 DMSO，并避免尖銳物品傷人等。

　　本生詳解生物細(xì)胞凍存管，本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司