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　　雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍：96T

　　2.2ng/L -90 ng/L

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素(CT)含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞降鈣素(CT)。用純化的雞降鈣素(CT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素(CT)，再與 HRP 標(biāo)記的降鈣素(CT)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素(CT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞降鈣素(CT)濃度。

　　雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

　　試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

　　7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

　　11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

　　標(biāo)本要

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

　　馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過

　　(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后 37℃溫育30分鐘。

　　4.配液：將 30倍濃 30倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜 30后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同 3。

　　8.洗滌：操作同 5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總：

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有析出，雞降鈣素(CT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的 OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：2-8℃。

　　2.有效期：6個(gè)月

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司