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ELISA實(shí)驗(yàn)中加樣應(yīng)注意的問題
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ELISA實(shí)驗(yàn)以其靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對實(shí)驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,就有可能產(chǎn)生不準(zhǔn)確的結(jié)果。我們就來介紹一下實(shí)驗(yàn)中加樣可能會碰到的問題。
1、加樣時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。遇到這種情況,如果標(biāo)本為血清的話,可以將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;如果標(biāo)本為血漿,就必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2、手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱的時候需要等待。如果標(biāo)本較多時,可以分批操作,加樣后一定要及時放入孵箱。
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外,血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。遇到這種情況,可以在加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。如果采用AT或其他全自動加樣,請選擇FAME或其他處理儀器加酶試劑。
為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行加樣,同時做好室內(nèi)質(zhì)控,要以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度檢測每一份標(biāo)本。
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