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常見(jiàn)血清使用問(wèn)題
1.血清使用時(shí)一定需要滅活么?
答:實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒(méi)有任何作用,甚至因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。
2.何謂FBS,FCS,CS,HS?
答:FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,F(xiàn)CS乃錯(cuò)誤的使用字眼,請(qǐng)不要再使用。CS(calfserum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。
3.保存血清的方法是什么?
答:我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
4.如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
答:將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
5.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?
答:血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的原因。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。不使用過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。
6.如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生?
答:(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),非常容易產(chǎn)生沉淀物。
(2)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(3)請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
(5)若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
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