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本生帶您了解 pcr 耗材，八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!
 

先天我們來聊聊 PCR 實驗中很關鍵的要素——耗材。作為 PCR 常客，了解 PCR 耗材相關的特性和術語是有必要的。
 

市面上的 PCR 耗材有很多，各種品牌、規(guī)格、顏色等，讓人眼花繚亂。我們來慢慢認識它。材質 PCR 耗材的原材料通常是聚丙烯。它是種很好的耐熱惰性物質(使用溫度范圍為 -30～140℃)，能夠承受 PCR 反應熱循環(huán)過程中的熱能變化，很好地封閉和保護 PCR 反應體系中的物質。
 

顏色常見的有白管和透明管。在傳統(tǒng) PCR 實驗中，兩者沒有區(qū)別。但是，在相同的熒光定量/qPCR 實驗中，對于頂端信號讀取的 qPCR 儀器(在管的上方采集熒光信號)來說，白管的靈敏度和致性相對更高。這是為什么呢?
 

>>與透明管相比，A  白管得到的 Ct 值更低；B  白管得到的重復性更好
 

qPCR 的核心數(shù)據(jù)是 Ct 值，而熒光信號是 Ct 值計算的數(shù)據(jù)來源，所以管內的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射(下圖 A)，進而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁)，被模塊吸收或發(fā)生不致反射等情況。相比于透明管，在白管的頂端能夠采集到更強，更聚焦的熒光信號。
 

A 透明管和白管中熒光信號走向；B 分別加入等量熒光素后，熒光強度對比

So，假如你正在使用的是頂讀 qPCR 儀，那么安利下，不妨用白管試試哦~
 

質量(是否干凈)這里強調下耗材質量的重要性。qPCR 耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細菌和 DNA 酶，但不能去除灰塵和 DNA 殘留，它們可能會抑制 PCR 反應或產生非特異性擴增。物質是具有吸光度的，即便是很小的污染物也會吸收反應體系中的熒光，影響熒光信號的采集。用個夸張版的實驗來演示下雜質污染對實驗的影響，在八聯(lián)排的個反應孔中放入粒雜質，不出所料，擴增結果曲線出現(xiàn)了顯著的異常。
 

↑ 8 復孔重復性反應結果，左邊孔中的雜質讓曲線“跑偏”
 

Tips 注意不要讓耗材長期暴露在空氣中，取出耗材后，定要快速封好包裝袋，避免用裸手接觸。有條件的話，可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量
 

容量決定了可加樣的多少(反應體積)。加樣過多會導致熱傳導效率下降，溢出或交叉污染;而加樣不足會引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR 儀的加熱模塊也會決定可適配的耗材和適用的反應體系大小。通量很容易理解，就是單次實驗多能上多少個樣品。常見的容量和通量規(guī)格如下表所示
 

單管/八聯(lián)排 0.2mL、0.1mL

96 孔板 0.2mL、0.1mL

384 孔板 0.02mL

容量規(guī)格也常用標準和低容量來區(qū)分。low profile(低容)耗材的高度更低，這種短小設計地減少了反應體系上方的空間(“死體積”——無用部分)，降低熱循環(huán)過程中的蒸發(fā)影響，同時能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹，提高熱傳導效率。因此，低容管也被稱為“快速”管或板。
 

Tips 常見的反應體積般為 20 µL，推薦使用 0.1 mL 或 low profile 的低容反應管。管壁厚度
 

PCR 耗材的管壁厚度要均，才能提供致的熱傳導。超薄管壁較標準版薄 50%，可進步減少熱屏障，帶來更快更好的反應效果。當然，建議選超薄的。
 

透明度 qPCR 的管蓋和封膜需要具有很高的光學透性，確保佳的熒光信號的穿透和傳遞，減少失真(針對頂讀 qPCR 儀)。管壁的透明度越高反倒會影響實驗結果，理由在面解釋過。傳統(tǒng) PCR 可忽略此特點。裙邊 PCR 板的裙邊指的是板的周圍延伸部分。額.......這個裙邊作用是在構建反應體系時為移液過程提供穩(wěn)定性支撐，以及結合自動化工作站時提供機械強度和抓手。常見的有三種：無裙邊、半裙邊和全裙邊(對應下圖 A、B、C)。
 

Tips 簡單理解就是，裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動化批量處理提供便利，與機械臂的結合。在常規(guī)科研實驗室中可能不太需要，使用無裙邊板即可。
 

封板膜

PCR 封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見，適配于 96 或 384 孔板，要有足夠好的光透性�？梢栽诜饽�時用個小卡片把孔周圍的膜壓緊，避免漏氣等現(xiàn)象。實驗室里的貼膜 boy 們應該很熟悉了吧。可以簡單理解為......
 

黏性鋁膜可能比較少見，盡管不適合 qPCR，但對于光敏樣品是理想的耗材，由于可以穿刺，便于 PCR 中樣品轉移。(適用于傳統(tǒng) PCR)