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干貨分享:血清知識點—血清使用注意事項
閱讀次數(shù):334 發(fā)布時間:2023/6/8 11:13:59
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  干貨分享:血清知識點—血清使用注意事項
 

  血清類別

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  血清主要成分

  血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展,但仍存在一些問題。主要是:

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  :血清的成份可能有幾百種之多,目對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難;

  第二:血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,因此,要保證每批血清的相似性為困難,從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制;

  第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認為是“瓶中惡化”的原因。

  血清鑒別方法

  血清

  血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血塊收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學(xué)成分的分析,都以血清為樣品。

  血漿

  血液成分

  血漿是血液的液體成分,血細胞懸濁于其中。人體含有2750-3300毫升血漿,約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水(體積的90%),其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白,還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞,同時也是運輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。

  將新鮮血液離心,使血細胞沉降,上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。

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  血清主要作用

  ●提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質(zhì)。

  ●提供激素和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素(氫化可的松、地塞米松)、類固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。

  ●提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。

  ●提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。

  ●對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。

  血清常見問題

  一、保存血清好的方法?

  血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

  二、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

  將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

  三、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

  1. 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

  2. 解凍血清時,請隨時搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀發(fā)生

  3. 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

  4. 血清熱滅活非常容易造成沉淀物增多,若非必要,可無須做此步驟。

  5. 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。

  四、何謂熱滅活?

  一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。

  五、有必要做熱滅活嗎?

  實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是"小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

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