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熱點(diǎn)新聞:胎牛血清凍存有哪些注意事項(xiàng)
血清溶解建議-如何減少沉淀:
● 將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱12-24小時(shí)左右使之浴解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
● 切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來的血清直接放在水浴中,無論室溫的水或者37℃的水,因?yàn)樵谒≈醒逖杆偃刍,很大的溫?-20℃到37℃,溫差為57℃)其容易造成血清產(chǎn)生沉淀。
● 直接放65℃水浴中更是其殘忍的做法,是對(duì)血清的褻玩,對(duì)科學(xué)規(guī)則的粗暴踐踏!
● 血清應(yīng)該在-10℃以下保存。若一次無法用完一瓶,應(yīng)該無菌分裝,再冷凍保存。
胎牛血清凍存的注意事項(xiàng):
1. 需要長(zhǎng)期保存的血清有必要儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)刻切勿超過1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因而,血清在凍入低溫冰箱,有必要預(yù)留一定體積空間,不然易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/p>
2. 合規(guī)生產(chǎn)企業(yè)供給的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾器過濾血清。
3. 瓶裝血清凍結(jié)需采用逐漸凍結(jié)法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡),使溫度與成分均一,削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃融化,溫差大的情況下血清容易形成蛋白質(zhì)凝聚而出現(xiàn)沉積和沉淀絮狀物。
4. 熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已徹底凍結(jié)的血清。加熱過程中須規(guī)矩?fù)u晃均勻。目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活,除非有必要,一般不建議做此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)形成血清沉積增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:滑潤(rùn)肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強(qiáng)吞噬作用、促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)作化學(xué)趨化和活化。相關(guān)研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。
5. 切勿將血清在37℃放置太久或者反復(fù)凍融,不然血清會(huì)變得污濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。
6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結(jié)后血清中纖維蛋白形成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量。可分裝至無菌離心管400g離心去除,也可不用處理直接加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。完全不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。
7. 顯微鏡下小黑點(diǎn)是由于經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點(diǎn),常誤認(rèn)為血清受污染。
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