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　　BUNSEN本生分享：ELISA試驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題原因分析

　　一、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果顯色淡、靈敏度品低的原因。

　　1、移液的樣品吸量不足，移液時(shí)抽吸、排放太快，移液嘴內(nèi)壁掛液太多貨內(nèi)壁不清潔，造成加樣量不準(zhǔn)。

　　2、恒溫箱溫度不是37℃(或43℃)，或多塊反應(yīng)板重疊放置造成板孔內(nèi)的實(shí)際溫度偏差，使抗原、抗體復(fù)合物形成過(guò)少。

　　3、保溫時(shí)間不足，抗原、抗體反應(yīng)不

　　4、顯色劑加入量不足。

　　5、顯色液的A、B液比例不對(duì)。

　　6、洗滌時(shí)沖擊力過(guò)大，洗滌液浸泡時(shí)間太長(zhǎng)，洗滌次數(shù)增加，導(dǎo)致已形成的抗原、抗體復(fù)合物洗脫。

　　7、底物反應(yīng)的溫度不夠，時(shí)間不足。

　　8、試劑盒在運(yùn)輸、保存期間放置的溫度太高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，造成抗原、抗體效價(jià)下降，酶的活力降低。

　　9、試劑盒已超出保存有效期，抗原、抗體效價(jià)下降，酶活力降低。
 

　　二、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽(yáng)性對(duì)照不顯色的原因

　　1、洗滌液配制有誤。

　　2、終止液誤作為濃縮洗滌液或酶結(jié)合物稀釋液使用。

　　3、漏加酶結(jié)合物，物價(jià)酶結(jié)合物或在酶標(biāo)二抗的試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)順序錯(cuò)誤。

　　4、終止液當(dāng)做底物緩沖液使用

　　5、配制溶液中殘留了解滅火酶活力的物質(zhì)。

　　6、底物中未加OPD或TMB。

　　7、運(yùn)輸、貯存不當(dāng)，導(dǎo)致沒(méi)活力喪失。

　　8、底物液中未加過(guò)氧化氫或放置過(guò)久過(guò)氧化氫失效。

　　三、而莉薩是嚴(yán)重結(jié)果全部顯色的原因

　　1、酶結(jié)合物的濃度過(guò)大

　　2、恒溫箱溫度較高，酶結(jié)合物光片時(shí)間或底物顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

　　3、洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留或酶結(jié)合物殘留。

　　4、底物配置時(shí)間過(guò)久，底物受光照射時(shí)間較長(zhǎng)或被污染。

　　5、整批樣品放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)被污染或生長(zhǎng)細(xì)菌。

　　6、一夜醉從復(fù)使用時(shí)，未清洗干凈或消毒不。

　　7、配制溶液的水質(zhì)有問(wèn)題。

　　四、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果陰、樣對(duì)照顯色差距較小的原因

　　1、稀釋不準(zhǔn)。加樣量不準(zhǔn)。

　　2、加樣時(shí)個(gè)空軍被污染

　　3、底物不新鮮，配制時(shí)間較長(zhǎng)或被污染。

　　4、試劑效價(jià)下降或超過(guò)了試劑的有效使用期。

　　5、配制溶液的水質(zhì)有問(wèn)題

　　五、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果重復(fù)性不好的原因

　　1、樣品加入量多少不一，加樣時(shí)間又長(zhǎng)又短。

　　2、樣品加入后為充分混合均勻。

　　3、移液加樣器加樣量不一致。

　　4、酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)。

　　5、操作過(guò)程中個(gè)別反應(yīng)孔中液體外濺。

　　6、不同批號(hào)試劑混用。

　　7、瓶蓋交叉使用

　　8、溫育條件和保溫時(shí)間不一致。

　　9、洗滌條件不一致。

　　10、顯色條件和時(shí)間不一致。

　　11、邊緣效應(yīng)，導(dǎo)致周邊孔(尤為4個(gè)較)較中央孔顯色為深。

　　12、將酶結(jié)合物或底物溶液加載了孔壁上，并有殘留。

　　13、酶結(jié)合物充分混勻就加入反應(yīng)孔中。

　　14、多加或少加了酶結(jié)合物、底物。

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